文章來(lái)源:中華檢驗醫學(xué)雜志, 2023,46(4) : 347-359
作者:中國中西醫結合學(xué)會(huì )檢驗醫學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì )
摘要
胃癌是我國發(fā)病率第一的消化道惡性腫瘤,根據《2020全球最新癌癥負擔數據》顯示,2020年我國胃癌新發(fā)478 508萬(wàn)例,發(fā)病率約33.06/10萬(wàn),居中國惡性腫瘤發(fā)病率第2位;死亡373 789萬(wàn)例,死亡率約25.82/10萬(wàn),位列我國惡性腫瘤死亡率第3位[1]。幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染和胃癌篩查不足是我國胃癌高發(fā)的關(guān)鍵因素。我國目前Hp感染率達50%~56%,約7億人被感染[2]。在過(guò)去60年,西歐和北美的胃癌發(fā)病率逐漸下降,部分原因歸功于分餐制控制了Hp傳播,降低了胃癌發(fā)生風(fēng)險[3, 4]。除胃癌風(fēng)險因素減少和生活習慣改善等因素[2,5],對胃癌高危人群進(jìn)行胃癌篩查已成為有效方法之一[6, 7, 8, 9]。據數據統計顯示,胃癌患者的中位總生存時(shí)間僅16個(gè)月[10],為了延長(cháng)患者5年生存率,早期發(fā)現早期治療無(wú)疑是解決問(wèn)題的關(guān)鍵。因此,提升我國早期胃癌檢驗技術(shù)水平,提高早期胃癌篩查覆蓋率是降低我國胃癌死亡率和提升早期胃癌檢出率的重要措施[11, 12]。
早期胃癌預后良好,5年總生存率達90%以上[13, 14],進(jìn)展期胃癌5年生存率僅為30%[15, 16]。而我國早期胃癌診斷率低于10%,這是胃癌發(fā)病率和死亡率居于前列的重要原因[17]?!?ldquo;健康中國2030”規劃綱要》明確提出有序擴大癌癥篩查范圍,推進(jìn)癌癥早發(fā)現、早診斷、早治療,降低癌癥發(fā)病率和死亡率,總體癌癥5年生存率提高15%[18]?!栋┌Y防治實(shí)施方案(2019—2022年)》要求醫院建立“癌癥篩查和早診早治中心”,開(kāi)展胃癌機會(huì )性篩查[19]。機會(huì )性篩查可有效提高胃癌高危人群的早期診斷率,擴大癌癥篩查覆蓋率,防止早期胃癌進(jìn)展為中晚期胃癌。因此,我國亟待建立有效的標志物體系和用于大規模人群篩查的檢測方法以預警胃癌的發(fā)生[20]。
早期胃癌的檢出是我國面臨的一個(gè)重大挑戰。在胃癌發(fā)生早期,患者往往無(wú)明顯癥狀和體征,因此大部分確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期,且常伴有遠處轉移[21]。晚期患者通常具有吞咽困難、虛弱、消化不良、嘔吐、體重減輕、早期飽腹感和/或缺鐵性貧血等癥狀,這些非特異性癥狀容易被忽略,嚴重耽誤了病情控制和治療的最佳時(shí)間[4]。胃鏡和活檢是目前診斷胃癌的金標準[22, 23],是臨床上常用的胃腸道黏膜病變診斷方式。但中國胃癌危險人群超過(guò)3億人,現有的醫療資源只能完成每年3 000萬(wàn)例的胃鏡檢查[24]。同時(shí)患者對侵入性檢查依從性低,因此胃鏡與活檢難以應用于大規模胃癌篩查。尿素呼氣檢測[25, 26]、基因甲基化檢測[27]、胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)檢測[28]、胃泌素17(gastrin-17,G-17)檢測[11]等屬于無(wú)創(chuàng )檢驗,將可能篩選患有胃部疾病的人群,從而進(jìn)行精準預防[29]。以早期胃癌檢驗技術(shù)作為出發(fā)點(diǎn)的共識或指南可進(jìn)一步提升我國早期胃癌篩查水平,因此,中國中西醫結合學(xué)會(huì )檢驗醫學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì )組織國內相關(guān)領(lǐng)域專(zhuān)家進(jìn)行討論并制定本共識,以期更好地應用于臨床。
一、胃癌高危因素
胃癌的發(fā)展是一個(gè)慢性、多因素參與的惡性上皮黏膜病變[11,30, 31, 32],病理學(xué)上胃癌的連續發(fā)展過(guò)程為慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生或異型增生、原位癌、浸潤性胃癌[33],其中胃癌常見(jiàn)的癌前病變是指異型增生(上皮內瘤變)的病理學(xué)概念,位于胃癌發(fā)展過(guò)程中的腸上皮化生階段。上皮內瘤變分為低級別和高級別;低級別需要臨床隨訪(fǎng),定期監測;高級別則建議進(jìn)行內鏡檢查和胃黏膜切除。癌前病變可進(jìn)一步發(fā)展為早期胃癌,根據美國癌癥聯(lián)合會(huì )發(fā)布的胃癌TNM分期標準(第7版)[34],早期胃癌(T1N0/1~3)包括黏膜內浸潤癌和黏膜下浸潤癌,無(wú)論有無(wú)區域淋巴結轉移。從癌前病變到早期癌癥直至進(jìn)展期胃癌的時(shí)間窗為胃癌的早期預防和診斷提供了有利時(shí)機。
胃癌的發(fā)病率和死亡率均隨年齡增長(cháng)而上升,在《中國早期胃癌篩查流程專(zhuān)家共識意見(jiàn)》[20]中,我國學(xué)者建議將40歲作為胃癌篩查的起始年齡。此外,早期胃癌無(wú)明顯癥狀,因此不應因無(wú)癥狀而忽視胃癌高危人群。該共識指出,胃癌高危人群一般指年齡40歲及以上,且有胃癌高發(fā)區、Hp感染、既往胃癌前疾病、胃癌患者一級親屬、存在胃癌其他高危因素的人群。此外,該共識以由5 000多例驗證隊列證實(shí)的新型胃癌篩查評分系統為依據,建議對有吸煙史、有重度飲酒習慣、作息和飲食不規律、近親有胃癌患者的人群每年進(jìn)行1次胃部檢測,并建議對Hp感染者和既往患有慢性萎縮性胃炎、慢性胃潰瘍、胃息肉、胃黏膜肥厚等其他胃癌前疾病的人群,每3~6個(gè)月進(jìn)行1次胃部檢測。
二、早期胃癌的檢驗技術(shù)
《中國早期胃癌篩查流程專(zhuān)家共識意見(jiàn)》[20]總結了胃癌篩查方法和策略,明確了胃癌篩查推薦流程,采用新的胃癌風(fēng)險人群篩查評分系統,提出內鏡精查策略,以提高早期胃癌診斷率。早期胃癌檢驗技術(shù)根據檢驗樣品及檢測方式不同可以分為呼氣檢測技術(shù)、血清學(xué)免疫檢測技術(shù)和分子檢測技術(shù)。
(一)呼氣檢測技術(shù)
呼氣檢測即通過(guò)檢測呼出的氣體進(jìn)行疾病診斷。呼氣檢測技術(shù)分為兩類(lèi):一類(lèi)是檢測呼氣中的無(wú)機物。臨床中已有的呼氣檢測項目包括Hp檢測、一氧化碳檢測新生兒黃疸、一氧化氮檢測哮喘等,其中應用最廣泛的是尿素呼氣試驗(urea breath test,UBT)檢測Hp[35],受檢者通過(guò)口服帶有示蹤標記的尿素丸,Hp產(chǎn)生的尿素酶會(huì )分解尿素,通過(guò)測定其呼出氣體中同位素標記的二氧化碳判斷有無(wú)Hp感染,靈敏度可達90%以上[35],該呼氣檢測技術(shù)可進(jìn)一步評估早期胃癌發(fā)生的風(fēng)險因素。在實(shí)際應用中,上呼吸道感染患者可能會(huì )服用抗生素或消炎類(lèi)藥物,易導致UBT結果呈假陰性[2]。因此,建議上呼吸道感染患者在愈后再進(jìn)行呼氣檢測。另一類(lèi)是檢測呼氣中的有機物,這類(lèi)標志物反映人體生理病理信息,可作為疾病診斷和健康監測的依據。2017年,呼氣揮發(fā)性有機物檢測[36]實(shí)現了一次性診斷胃癌、肺癌、結直腸癌等17種高發(fā)癌癥。呼氣檢測技術(shù)具有操作簡(jiǎn)易、精準、無(wú)創(chuàng )的優(yōu)勢,無(wú)機物呼氣檢測成本低、實(shí)現設備小型化,適用于大范圍臨床應用。有機物呼吸檢測現階段離不開(kāi)高精密度的色譜和質(zhì)譜分析技術(shù),暫不適于大規模臨床應用。
共識1 呼氣檢測技術(shù)主要檢測Hp感染,可用于早期胃癌風(fēng)險評估和胃部健康監測。
(二)血清學(xué)免疫檢測技術(shù)
血清學(xué)免疫檢測技術(shù)是以血液為樣本,在體外進(jìn)行的抗原抗體反應,在胃癌早期檢驗中,具有非侵入性、依從性好、操作方便等優(yōu)勢。應用比較廣泛的是化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescent immunoassay,CLIA)和酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。
1.CLIA:CLIA是將發(fā)光物質(zhì)或酶標記在抗原或抗體上,利用抗原抗體特異性反應將待測抗原從復雜樣品(血清等)中分離出來(lái),免疫反應結束后,加入氧化劑或酶底物而發(fā)光,通過(guò)測量發(fā)光強度,根據標準曲線(xiàn)對待測物的濃度進(jìn)行定量分析。CLIA技術(shù)具有快速、準確、靈敏、安全無(wú)污染、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),并廣泛應用于腫瘤、傳染病、心臟疾病等臨床檢測。CLIA可檢測多種類(lèi)別的免疫檢測標志物,包括腫瘤標志物的檢測。已廣泛應用于臨床的胃癌標志物包括癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、糖類(lèi)抗原(carbohydrate antigen,CA)19-9、CA72-4和CA24-2等[37]。
2.ELISA:ELISA用于檢測血清中腫瘤標志物的蛋白表達水平,可實(shí)時(shí)檢測表達、用于術(shù)后監測。臨床ELISA測定通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式。操作過(guò)程簡(jiǎn)單,涉及標本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色等過(guò)程。ELISA測定的臨床標本包括血清(漿)、唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。使用血清標本測定的標志物有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素和特種蛋白等。ELISA具有靈敏度高、特異性強、無(wú)痛苦、檢測成本低、方便快捷等特點(diǎn)。在臨床研究中,ELISA可用于人體血清PG水平或胃特異性蛋白三葉因子1(refoil factor family,TFF1)和去整合素金屬蛋白酶12(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM12)等含量的檢測[38],但其作為傳統檢測手段,在實(shí)際應用中其靈敏度和自動(dòng)化程度不及化學(xué)發(fā)光技術(shù),已逐步被取代。
3.其他免疫檢測技術(shù):免疫檢測技術(shù)中還有一些其他常用技術(shù),例如膠體金免疫層析法(gold immunochromatography assay,GICA)和熒光免疫層析法(fluorescence immunochromatography assay,FICA)。GICA是以硝酸纖維素膜為固相載體,膠體金為標記物,通過(guò)抗原抗體特異性反應建立的一種新型診斷技術(shù),具有方便、快捷、廉價(jià)、易保存等優(yōu)勢,目前已應用在胃癌檢測中,例如Hp抗原抗體檢測等[39]。膠體金免疫層析試紙條具有成本低廉、樣品需求量低、便攜、靈敏度高等優(yōu)勢,但只能實(shí)現定性或半定量檢測。FICA是在免疫層析技術(shù)的基礎上,通過(guò)檢測熒光信號強度來(lái)定量檢測待測物濃度的技術(shù)。FICA具有靈敏度高、穩定性強和成本低等特點(diǎn),在早期胃癌中應用于CEA和G-17等標志物的檢測[40],其局限性與免疫層析標記原料的選擇密切相關(guān)。
共識2 血清學(xué)免疫檢測技術(shù)可用于多種血清腫瘤標志物及胃特異性蛋白的檢測,以輔助早期胃癌的篩查。
(三)分子檢測技術(shù)
分子檢測技術(shù)是應用分子生物學(xué)方法分析受檢者基因是否有缺陷或者表達產(chǎn)物是否異常,以此達到疾病診斷的目的。目前應用于胃癌早期診斷的分子檢測技術(shù)有熒光定量PCR檢測、二代測序(next-generation sequencing,NGS)以及質(zhì)譜檢測技術(shù)。
1.熒光定量PCR檢測技術(shù):熒光定量PCR檢測技術(shù)是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。該技術(shù)利用熒光定量PCR儀,操作簡(jiǎn)單,同時(shí)具有高靈敏度和特異度、自動(dòng)化程度高、無(wú)污染和實(shí)時(shí)等特點(diǎn),檢測的樣本包括胃活檢組織、糞便、血液、牙菌斑、唾液等。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)不但能有效地檢測到腫瘤早期的基因突變,而且可以準確檢測這一階段基因表達量。目前胃癌檢測的標志物包括SLC6A3、Septin9、RNF180等[27,41]。利用PCR熒光探針?lè )?,將甲基化的DNA做三重PCR擴增,與甲基化RNF180基因和Septin9基因序列特異性結合的熒光素探針可以在PCR反應中專(zhuān)一地檢測出甲基化序列,以此實(shí)現胃癌基因甲基化檢測。除此之外,熒光定量PCR檢測技術(shù)目前已應用于多種微生物感染的檢測,包括Hp分型檢測及耐藥性檢測[42],在分子水平上實(shí)現快速檢測CagA和VacA基因,并鑒定由23S rRNA基因突變介導的克拉霉素耐藥性[43]。
2. NGS檢測技術(shù):NGS作為一種高通量基因測序手段,主要技術(shù)方案包括靶向測序、全基因組測序、全外顯子測序等[44]。在腫瘤研究領(lǐng)域,NGS用于伴隨診斷、鑒別診斷、腫瘤早篩和微小殘留病灶(minimal residual disease,MRD)復發(fā)監測等。一項循環(huán)游離基因組譜臨床試驗[45]表明,甲基化檢測比堿基突變和基因片段拷貝數變異能更準確地用于篩選。該研究研究了近3 000萬(wàn)個(gè)甲基化位點(diǎn),篩選出泛癌靶向甲基化檢測位點(diǎn),并對2 823例癌癥患者和1 254名健康人進(jìn)行靶向甲基化檢測。結果顯示泛癌早篩可檢測胃癌、結直腸癌、食管癌、肝癌、肺癌等50多種癌癥,Ⅰ~Ⅲ期癌癥診斷的靈敏度約40.74%;對單種癌癥,如Ⅰ~Ⅲ期胃癌診斷的靈敏度約為67.6%,在檢測結果為陽(yáng)性的樣本中提供了原發(fā)腫瘤的高精度定位預測[45]。NGS的優(yōu)勢體現在高速測序和樣品的大規模處理,但其成本較高,對數據處理專(zhuān)業(yè)能力要求高。
3.質(zhì)譜檢測技術(shù):生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)中的核心技術(shù)[46]。目前最常用的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜[47]可用于腫瘤早期診斷、療效監測和預后評估等。有研究發(fā)現利用質(zhì)譜技術(shù)可篩選血清脂質(zhì)標志物,比如脂肪酸合成酶和硬脂酰輔酶A1等[48],且早期胃癌組織的脂肪酸上調與脂肪酸合成酶過(guò)表達有關(guān)。質(zhì)譜檢測技術(shù)具有快速、準確、靈敏、自動(dòng)化及高通量等優(yōu)勢,廣泛應用于微生物領(lǐng)域,例如Hp表達蛋白的分析篩選。此外,質(zhì)譜支持的蛋白質(zhì)組學(xué)有助于發(fā)現腫瘤生物標志物,Zhou等[49]采用質(zhì)譜檢測技術(shù)分析了早期胃癌組和對照組的血液樣本,共鑒定出2 040種蛋白質(zhì),發(fā)現了11種差異表達的蛋白。該技術(shù)有助于早期胃癌的鑒別,并為早期胃癌的診斷提供潛在的生物標志物。
共識3 熒光定量PCR檢測技術(shù)適于現階段早期胃癌檢驗技術(shù)的發(fā)展需求;NGS目前更多應用于前瞻性臨床試驗;質(zhì)譜檢測技術(shù)可用于早期胃癌差異蛋白的篩選。
(四)檢驗技術(shù)優(yōu)劣勢比較
本共識詳細分析了早期胃癌的檢驗技術(shù)方法,側重于預防和早檢。各種常見(jiàn)的早期胃癌檢驗技術(shù)各有優(yōu)勢和局限性(表1)。
三、早期胃癌檢驗標志物
早期胃癌檢驗技術(shù)促進(jìn)了相關(guān)標志物的發(fā)現與應用性發(fā)展,分為Hp標志物、PG和胃泌素等胃相關(guān)標志物、腫瘤標志物和基因甲基化標志物。
(一)Hp標志物
Hp是一種螺旋形革蘭陰性細菌,定植于胃黏膜的黏膜坑層[50]。Hp慢性感染引起的慢性胃炎是持續性炎癥的早期表現,隨著(zhù)病情的發(fā)展,胃上皮細胞的損傷可導致胃癌的發(fā)展[30,51, 52]。20%的感染患者會(huì )在胃基質(zhì)中出現胃潰瘍或增生性息肉。感染還會(huì )導致胃組織內上皮-間質(zhì)轉化的進(jìn)展,增加胃癌發(fā)展的可能性[53]。雖然世界上有一半人口感染Hp,但僅1%~2%的感染者發(fā)展為胃癌。在亞洲進(jìn)行的一項前瞻性研究中,3%~6%Hp感染受試者在10年內發(fā)展為胃癌[54]。2021年美國衛生及公共服務(wù)部下屬美國毒理研究所發(fā)布了第15版致癌物報告,Hp慢性感染被列為明確致癌物且Hp陽(yáng)性感染者患胃癌的風(fēng)險比例比陰性者高4~6倍。因此,定期進(jìn)行Hp檢測有助于預防早期胃癌[55]。2020年召開(kāi)的亞太消化系醫學(xué)會(huì )會(huì )議上,來(lái)自11個(gè)國家的28名專(zhuān)家建議,Hp感染的篩查和治療策略最好在萎縮性胃炎和腸化生發(fā)生前進(jìn)行,晚期胃萎縮或腸化生患者應在根除Hp后接受內鏡監測[56]。臨床測定Hp的方法包括UBT、抗體檢測、糞便抗原檢測、快速尿素酶檢測等,由于患者依從性高和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢,UBT和血清Hp抗體檢測是常用的2種檢測方式。
1.UBT:UBT包括C13-UBT和C14-UBT,可作為一種與組織學(xué)及/或細菌培養相仿的診斷Hp感染的金標準。Best等[35]納入101項研究,涉及11 003名受試者,比較了UBT、血清學(xué)和糞便抗原檢測等方式在有癥狀和無(wú)癥狀人群中Hp感染的診斷準確性,其中C13-UBT對Hp感染診斷的靈敏度為0.94(95%CI 0.89~0.97),C14-UBT對Hp感染診斷的靈敏度為0.92(95%CI 0.89~0.94)。UBT對Hp感染診斷的靈敏度和特異度較高,操作簡(jiǎn)便,具有明顯優(yōu)勢。需要注意的是,由于C13檢測比C14輻射量小,C13檢測更適用于兒童和孕婦群體。
2.血清Hp抗體檢測:Hp感染的血清學(xué)反應可以通過(guò)測定抗Hp免疫球蛋白G(IgG)抗體來(lái)評估[57]。Hp根除后抗體仍能持續存在半年以上,因此血清Hp抗體檢測不適用于療效監測。一項包括2 560例受試者的回顧性研究顯示,血清Hp IgG的靈敏度高于UBT和糞便抗原試驗[58],其靈敏度和陰性預測值使其可應用于胃癌高危人群的分層。對于血清學(xué)檢查已經(jīng)呈陽(yáng)性的人群,進(jìn)一步進(jìn)行糞便抗原或UBT檢測,可有效提高患病人群的診斷準確性[35,58]。
Hp感染發(fā)展為胃癌與Hp攜帶的毒力因子及毒力多樣性有關(guān)。表達空泡毒素蛋白(vacuolating cytotoxin A,VacA)和細胞毒素相關(guān)基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)是公認的Hp致病因子[59, 60],臨床上將Hp分為Ⅰ型和Ⅱ型,Ⅰ型Hp具有侵襲性,其VacA和CagA抗體呈陽(yáng)性,促進(jìn)胃潰瘍、胃癌的發(fā)生發(fā)展。而Ⅱ型Hp的VacA和CagA抗體為陰性,不產(chǎn)生細胞毒素菌株,毒性較小。對于消化道Hp感染者,分型檢測為根治性治療提供了重要的診斷價(jià)值[61]。
共識4 Hp感染是胃癌防治中可控的危險因素,可通過(guò)UBT和血清Hp抗體檢測來(lái)評估胃癌高危人群。UBT中的C13檢測輻射量小,更適用于兒童和孕婦群體。血清Hp抗體在Hp根除后仍能持續存在半年以上,不適用于療效監測。
(二)胃相關(guān)標志物
血清PG原和血清胃泌素反映胃黏膜不同部位的健康狀態(tài),兩者的含量變化對胃部疾病的診斷具有臨床價(jià)值。
1.血清PG原檢測:PG是胃蛋白酶促酶,其血清水平反映不同部位胃黏膜的形態(tài)與功能,在血液中作為胃黏膜改變的間接性標志物。PG根據生化性質(zhì)及免疫原性分為PG-I與PG-Ⅱ[28,62],PG-I主要由胃底與胃體(近腹端)的主細胞分泌產(chǎn)生,是評價(jià)胃泌酸腺細胞功能的指標;PG-Ⅱ由胃底腺主細胞及黏液頸細胞分泌,與胃底黏膜病變相關(guān)性較高。在Hp感染患者中,血清PG-Ⅰ或PG-Ⅰ/PG-Ⅱ的比值(PGR)與胃癌患者同樣表達降低,易導致假陽(yáng)性的產(chǎn)生,因此PG檢測通常不被用作大規模的胃癌篩查。但是研究表明,PG檢測對于根除Hp后的胃癌癌前病變篩查有效。PG檢測體系測定抗體-抗原復合物濃度的方法不同[63, 64],陽(yáng)性樣本的測定數值和閾值顯著(zhù)不同,導致結果的不確定性[62,65]。在實(shí)際操作中,通常使用PG-Ⅰ<70 ng/ml且PGR<3作為診斷萎縮性胃炎的臨界值[66],當PG-Ⅰ與PGR同時(shí)滿(mǎn)足臨界值時(shí),才判斷為陽(yáng)性。由于PG檢測受不同地區飲食習慣的影響較大,因此推薦不同地區根據當地的實(shí)際情況建立適合本實(shí)驗室的參考區間。血清PG水平異常是胃癌發(fā)生的風(fēng)險因素,Zhang等[67]在對1 501名高發(fā)胃癌社區人群測定血清PG水平后,進(jìn)行了14年的胃癌發(fā)展跟蹤調查,結果顯示PG水平異常人群的胃癌發(fā)病率高于PG正常人群胃癌的發(fā)病率(23.1‰比5.93‰,P<0.05)?!吨袊赴┖Y查與早診早治指南》[68]明確指出血清PG檢測主要反映萎縮性胃炎,聯(lián)合Hp可以用于胃癌高危個(gè)體的檢測。但由于PG診斷早期胃癌的靈敏度較低,不建議將PG檢測單獨用于胃癌篩查。
2.血清胃泌素檢測:胃泌素由胃竇G細胞在正常生理消化過(guò)程中釋放,G-17是外周血中最豐富的循環(huán)胃泌素[11,69]。有胃部疾病的患者的胃黏膜功能與健康人群具有明顯的區別,血液中G-17水平偏高。Zagari等[70]對包含4 241例受試者的20項研究的薈萃分析評估了血清標志物對預測胃部疾病的檢驗效果,結果顯示G-17對萎縮性胃炎診斷的靈敏度為62%(95%CI 0.49~0.74),特異度為91%(95%CI 0.81~0.96)。近年來(lái),PG和G-17聯(lián)合檢測被稱(chēng)為新“ABC”法,2018年李夢(mèng)穎等[71]研究了新“ABC”法對胃癌診斷的靈敏度和特異度分別是92.59%和54.46%,對癌前病變診斷的靈敏度和特異度分別為62.10%和75.00%,與舊“ABC”法(PG聯(lián)合Hp IgG抗體檢測)相比,新“ABC”法對胃癌診斷的靈敏度和特異度更高。這些研究表明單一血清學(xué)標志物的診斷效果有限,不同標志物的組合可提高診斷價(jià)值[72]。僅通過(guò)血清學(xué)檢測排除胃黏膜病變在臨床上容易引起誤診,因此有必要綜合利用各種臨床數據,以便獲得最佳診斷。
共識5 PG主要檢測萎縮性胃炎,G-17檢測覆蓋胃潰瘍、慢性萎縮性胃炎、胃癌等多種胃腸道疾病。Hp感染患者的血清PG-I或PGR呈降低表達,建議根除Hp后,再做胃癌癌前病變的PG篩查。PG和G-17聯(lián)合檢測對胃部疾病診斷價(jià)值高,可用于胃癌風(fēng)險提示。
(三)腫瘤標志物
腫瘤標志物是腫瘤本身或宿主微環(huán)境中存在或產(chǎn)生的物質(zhì),涵蓋蛋白質(zhì)、激素、酶等代謝物,能夠響應腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,并且可以通過(guò)化學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行定性或定量檢測[73]。傳統消化道腫瘤標志物包括CEA、CA19-9、CA72-4等[74, 75, 76]。
1.CEA:CEA是一種參與細胞黏附的糖蛋白,在健康個(gè)體的血液中水平較低[77],當內胚層分化組織出現病變時(shí),血液中CEA水平會(huì )明顯升高[78, 79]。Deng等[80]檢索了14 651例胃癌患者數據,通過(guò)薈萃分析尋找CEA水平變化與胃癌預后的相關(guān)性,結果表明CEA水平升高與胃癌預后不良風(fēng)險呈正相關(guān),CEA可能作為影響胃癌預后的獨立因素。同時(shí)也有研究表明CEA在早期胃癌診斷中不具有明顯價(jià)值。So等[81]對4 566例受試者進(jìn)行了上消化道內窺鏡檢查,并測定了CEA、CA19-9、PG等基于血液的胃癌標志物的檢測性能,結果顯示CEA對早期胃癌診斷的特異度雖然高于90%,但靈敏度低于30%,表明CEA單獨檢測在早期胃癌診斷中價(jià)值有限[80, 81, 82, 83]。
2.CA19-9:CA19-9是一種存在于血液循環(huán)中的非特異性腫瘤糖類(lèi)抗原,在黏液性腫瘤中會(huì )異常升高[84, 85],主要用于鑒別診斷胃癌、胰腺癌以及結直腸癌等[86, 87, 88]。Wang等[89]對一項由329名參與者組成的隊列進(jìn)行了G-17、CEA、CA19-9和CA12-5 4項指標在胃癌檢測靈敏度方面的對比顯示,CA19-9對胃癌診斷的靈敏度(20.00%)較低,這阻礙了其在早期胃癌診斷中的進(jìn)一步應用。而CA19-9與其他血清標志物的聯(lián)合檢測在胃癌診斷中具有明確的診斷價(jià)值,Liang等[90]對4 157名受試者(包括2 288例胃癌患者和1 869名健康人)聯(lián)合檢測了CA19-9、CA72-4和CEA,其對于胃癌診斷的靈敏度由單獨CA19-9的21.4%上升至48.2%,有效降低了胃癌漏診率。
3.CA72-4:CA72-4是一種高分子糖蛋白抗原,在良性腫瘤組織、體液和正常組織中不表達,但是在胃腸道腫瘤中高水平表達,并且可以釋放到血液中用于胃癌檢測。CA72-4通常被用作檢測胃癌和其他消化系統腫瘤的指標[91],為非特異性腫瘤標志物。Guo等[83]對522例胃癌患者,85例癌前病變患者以及219名健康人群進(jìn)行了CEA、CA72-4和CA19-9的診斷性能評估,結果顯示,CA72-4診斷胃癌的綜合靈敏度為63.24%,特異度為61.46%,但是無(wú)法有效區分健康人群和早期胃癌患者。Shimada等[92]評估了腫瘤標志物在胃癌診斷中的臨床價(jià)值,結果顯示CA72-4診斷Ⅰ期胃癌的靈敏度為12.0%,Ⅱ期的靈敏度為15.6%。雖然臨床上不建議單獨使用CA72-4診斷早期胃癌,但其在晚期胃癌診斷中具有明顯優(yōu)勢。Ohashi等[93]利用CEA和CA19-9腫瘤標志物的動(dòng)態(tài)變化監測胃癌術(shù)后患者是否復發(fā),綜合分析顯示,腫瘤標志物動(dòng)態(tài)變化對預后評估的效用較為明顯。
共識6 CEA、CA19-9、CA72-4等作為胃癌輔助診斷腫瘤標志物,對早期胃癌的診斷價(jià)值有限。監測上述腫瘤標志物的動(dòng)態(tài)變化有助于胃癌預后評估,且CEA、CA19-9、CA72-4聯(lián)合檢測可降低胃癌漏診率。
(四)基因甲基化標志物
早期胃癌檢驗現有標志物的發(fā)展與局限性在一定程度上促進(jìn)了新標志物的產(chǎn)生。如何最大程度地解決臨床面臨的問(wèn)題,不僅需要提升現有技術(shù),更需要推進(jìn)新技術(shù)。特定基因甲基化異常對于癌癥的早期診斷非常有益[94, 95],例如用于胃癌早期檢測的RNF180/Septin9基因甲基化等。
1.RNF180/Septin9(RS19)基因甲基化:研究發(fā)現,在胃癌患者血漿樣本中甲基化的RNF180及Septin9含量特征性增高[96]。RNF180作為腫瘤抑制基因,可抑制胃癌細胞的生長(cháng)增殖和遷移[97, 98]。當RNF180啟動(dòng)子區域發(fā)生甲基化時(shí),間接促進(jìn)胃癌細胞的生長(cháng)、分化及轉移[99]。2012年Cheung等[100]在56%的胃癌患者血漿中檢測到RNF180基因處于高甲基化狀態(tài),在健康對照組中未檢測到。Septin9基因同屬抑癌基因,與細胞凋亡及細胞分裂有關(guān)。Song等[101]對2 030例受試者進(jìn)行Septin9基因甲基化檢測,結果表明Septin9基因甲基化診斷胃癌靈敏度為47.7%,特異度為92.3%,但單一指標Septin9基因甲基化不足以反映胃部病變情況。
RS19基因甲基化檢測是聯(lián)合RNF180和Septin9兩個(gè)基因,利用PCR熒光探針?lè )?,通過(guò)DNA提取、亞硫酸氫鹽轉化和多重RCR等步驟完成外周血中游離DNA的甲基化檢測。由空軍軍醫大學(xué)第一附屬醫院主導的RS19對于早期胃癌診斷性能的臨床試驗共入組1 382例患者,其中胃癌患者680例,非胃癌患者702例。以胃鏡和/或病理結果檢測為參照,RS19基因甲基化檢測對胃癌的診斷靈敏度為61.76%,其中Ⅰ期的靈敏度為50.00%,Ⅱ期的靈敏度為62.32%。Cao等[102]在一項用Septin9和RNF180聯(lián)合診斷早期胃癌的研究中證明該檢測的診斷靈敏度遠高于傳統腫瘤標志物,且假陽(yáng)性率低于15%,有助于早期胃癌的及時(shí)發(fā)現。
2.多基因甲基化聯(lián)合其他指標檢測:多基因聯(lián)合甲基化檢測可提高早期胃癌檢測性能[103]。Ren等[104]鑒定了153種DNA甲基化生物標志物(包括DOCK10,CABIN1和KCNQ5等),對Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期胃癌診斷的靈敏度分別為44%、59%、78%,特異度為92%?;蚣谆推渌麡酥疚锫?lián)合檢測也能有效提高檢測性能。當Septin9基因甲基化與CEA、CA724、γ-突觸核蛋白或甲胎蛋白聯(lián)合使用時(shí),對胃癌診斷的靈敏度提高21%[101]。Yang等[96]納入了518例受試者進(jìn)行前瞻性隊列研究,結果顯示RS19聯(lián)合CA72-4對胃癌診斷的靈敏度比單基因甲基化檢測提高31.5%,因此RS19聯(lián)合其他指標檢測可提高早期胃癌檢出率。
共識7 RS19基因甲基化可用于檢測早期胃癌,陽(yáng)性受檢者應及時(shí)進(jìn)行胃鏡檢查;RS19基因甲基化聯(lián)合腫瘤標志物可進(jìn)一步提升胃癌診斷靈敏度。
(五)早期胃癌標志物綜合評價(jià)
對利用這些技術(shù)進(jìn)行早期胃癌檢測的標志物進(jìn)行綜合評價(jià),包括檢測性能(靈敏度、特異度)、早期胃癌檢出能力、患者依從性、操作簡(jiǎn)便性、檢測成本等(表2),供臨床診斷選擇參考。
四、早期胃癌檢驗推薦流程
為進(jìn)一步規范早期胃癌檢驗流程,在此結合各個(gè)技術(shù)以及標志物檢測的特點(diǎn)和適用場(chǎng)景,從早期胃癌檢驗技術(shù)角度出發(fā)作出檢驗推薦流程(圖1)。其中胃癌篩查目標人群是指40歲以上且有Hp感染風(fēng)險、有既往胃部疾病、有胃癌家族遺傳史等風(fēng)險因素的人群。
圖1 早期胃癌檢驗推薦流程
針對胃癌篩查目標人群,參考《中國早期胃癌篩查及內鏡診治共識意見(jiàn)》[105]對胃癌高危人群的劃分標準。對胃癌高危人群進(jìn)行PG、G-17和Hp檢測,當任意一項檢測結果為陽(yáng)性時(shí),建議進(jìn)行RS19基因甲基化檢測,并及時(shí)關(guān)注胃部健康。當基因甲基化檢測也呈現陽(yáng)性時(shí),應及時(shí)進(jìn)行胃鏡檢查,排除癌癥風(fēng)險,對于印戒細胞癌還需CT等影像學(xué)檢查;如果臨床確診為癌前病變,進(jìn)行相關(guān)治療的同時(shí),建議后續繼續關(guān)注胃部健康,利用RS19基因甲基化或者腫瘤標志物進(jìn)行隨訪(fǎng)監測;如臨床確診為胃癌,在術(shù)后或者放化療治療后,應注意定期隨訪(fǎng),預防復發(fā)。如果上述指標檢測結果為陰性,但是患者已出現胃部不適,建議結合臨床表現進(jìn)行胃部檢查。
共識8 PG、G-17、Hp檢測可作為胃癌篩查目標人群的初篩項目,RS19基因甲基化檢測作為胃癌高危篩查輔助診斷,胃部不適或RS19基因甲基化檢測陽(yáng)性的患者建議胃鏡檢查和活檢。
綜上,本共識探討了呼氣檢測、血清免疫學(xué)、分子檢測等早期胃癌檢驗技術(shù)。呼氣檢測技術(shù)中應用最為成熟的是UBT檢測Hp。血清免疫學(xué)檢測中的CLIA技術(shù)在臨床應用中優(yōu)于ELISA,在腫瘤標志物檢測中具有較好的應用前景,由于儀器成本高,適用于大型三甲醫院或檢測機構;而ELISA技術(shù)更適于基層醫療機構。分子檢測技術(shù)包括熒光定量PCR、NGS和質(zhì)譜檢測等,NGS側重于DNA檢測,但仍處于發(fā)展階段,如何降低篩查成本、解讀海量數據等是亟待解決的問(wèn)題。熒光定量PCR檢測技術(shù)不僅可檢測DNA,也可應用于基因甲基化檢測,以輔助診斷早期胃癌。由于PCR儀器的大量出現和廣泛使用,也使熒光定量PCR技術(shù)普遍適用于所有檢測實(shí)驗室;質(zhì)譜可通過(guò)蛋白篩選來(lái)達到發(fā)現早期胃癌的目的,在揭示癌癥發(fā)生的分子機制中將持續發(fā)揮作用。
檢驗技術(shù)的發(fā)展推動(dòng)著(zhù)早期胃癌標志物的發(fā)現、發(fā)展與利用。Hp感染是胃癌發(fā)生的危險因素,建議將Hp感染檢測作為早期胃癌篩查的必檢項目之一。PG檢測對根除Hp后的胃癌癌前病變篩查有效,臨床中PGR聯(lián)合檢測具有明確的診斷價(jià)值。同時(shí)PG和G-17聯(lián)合檢測較單一指標檢測具有更好的胃癌診斷價(jià)值。腫瘤標志物CEA、CA19-9、CA72-4檢測對于早期胃癌診斷的靈敏度不高,但在中晚期胃癌中表現良好,并且與其他標志物聯(lián)合使用在一定程度上會(huì )提高胃癌診斷的靈敏度;RS19基因甲基化適用于胃癌高風(fēng)險人群的檢測,可用于早期胃癌機會(huì )性篩查,同時(shí)RS19基因甲基化聯(lián)合腫瘤標志物檢測可提高對早期胃癌的診斷效能。需要注意的是,上述標志物檢測結果即使為陰性時(shí),也不能作為是否做胃鏡篩查的決定性因素,必須結合臨床癥狀進(jìn)行綜合判斷。
在防癌抗癌方案中,通過(guò)早期篩查,可有效提高治愈率、降低死亡率。因此,本共識結合早期胃癌檢驗技術(shù)的發(fā)展情況和實(shí)際臨床應用特點(diǎn),提出合理化建議,達成共識。在臨床實(shí)際應用時(shí),對于以上早期胃癌檢驗技術(shù)和標志物,在選擇過(guò)程中應充分考慮受檢者的依從性、實(shí)際健康狀況、醫療成本支出等因素,選擇其中一種或多種檢驗方法,以惠及更多患者。目前臨床早期胃癌的確診率仍遠遠不夠,因此提升檢驗技術(shù),優(yōu)化標志物勢在必行。
執筆人:馬亮(中日友好醫院檢驗科),曹永彤(中日友好醫院檢驗科)
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